非洲猪瘟病毒荧光 PCR 检测试剂盒（血液型）说明书

【产品货号】 NEQ11110 【产品名称】

通用名：非洲猪瘟病毒荧光 PCR 检测试剂盒（血液型）

商品名：无

英文名称：Real-time PCR Diagnostic Kit for African Swine Fever Virus（Type Blood Sample）

汉语拼音：Feizhou Zhuwen Bingdu Yingguang PCR Jiance Shijihe（Xueye Yangpin Xing） 【作用与用途】  用于抗凝血、血清等血液样品中非洲猪瘟病毒核酸的检测。

【主要成分与含量】

 

试剂盒组分	数量		装量
荧光 PCR 反应体系	1 管/盒		550µl/管
无菌无核酸酶水	1 管/盒		400µl/管
引物探针混合物	1 管/盒		140µl/管
阳性对照	1 管/盒		40µl/管
阴性对照	1 管/盒		40µl/管
【用法与判定】 1    用法 1.1    血液样品处理  用 EDTA 抗凝采血管采集血液，充分混匀，编号备用。样品处理后置 60℃灭活 30 分钟。 1.2    样品存放  采集或处理好的样品在 2～8℃保存应不超过 24 小时；若需长期保存，须放置-70℃以 下冰箱，并应避免反复冻融。 1.3    荧光 PCR 反应体系的配制  取出试剂盒中的各组分，置室温（15~25℃) 融化后瞬时离心，备用。 每次检验设阴、阳性对照。设待检样品、阳性对照和阴性对照的样品总份数为 n，按如下反应体系配制：
荧光 PCR 反应体系 引物探针混合物  无菌无核酸酶水		10μl×（n+1） 2.5μl×（n+1） 7μl×（n+1）

总量           19.5μl×（n+1）

将以上配制的反应体系充分混匀后，按 19.5μl/管分装至反应管中。分别取样品 0.5μl 加入相应反应管中， 盖紧管盖后瞬时离心。

1.4    荧光 PCR 反应条件

第一阶段：95℃ 20 秒；

第二阶段：95℃ 5 秒、60℃ 20 秒，共 40 个扩增循环。

荧光信号采集设定第二阶段退火（60℃ 20 秒）时；

对于 ABI 荧光 PCR 仪，选择 FAM 通道读取检测结果，淬灭基团选择“MGB”；

对于其他品牌的荧光 PCR 仪，选定 FAM 通道读取检测结果，淬灭基团选择“None”。

本产品使用特殊的 ROX Reference Dye，适用于所有 qPCR 仪器(无 ROX 校正仪器，低浓度 ROX 校正仪器，高浓度 ROX 校正仪器)，无需在不同的仪器上调整 ROX 的浓度。

哈尔滨国生生物科技股份有限公司

 

2     试验成立条件  阳性对照 Ct 值≤35 并出现典型的扩增曲线，阴性对照无 Ct 值或无典型的扩增曲 线，则判为试验成立。

3    判定  待检样品 Ct 值≤35 并出现典型的扩增曲线，判为阳性；待检样品无 Ct 值或 35＜Ct 值≤40 并且无典型的扩增曲线，判为阴性。

【产品性能指标】  本试剂盒检测企业工作参考品，阴、阳性符合率均为 100%；精密度试验表明：批内和 批间重复性好，检测结果 Ct  值的变异系数均<10%； 分析灵敏度试验表明，本试剂盒最低检出量为 500copies/ml。与感染部位相同或感染症状相似的其他病毒无交叉反应。

【注意事项】

1  试剂盒应在−20℃以下保存和运输。

2  本试剂盒仅用于体外检测使用，操作人员必须经过培训，试剂盒使用前请仔细阅读说明书全文。

3  不要使用过期组分或者不同批次组分混合使用。

4  使用时尽量避免反复冻融，如冻融，应不超过 3 次。

5  样品采集和处理过程应戴一次性手套，并及时更换，样品间严禁交叉污染。

6  荧光 PCR 实验严格分区操作，各区应有专用的手套、移液器等，不得交叉使用，避免污染；工作人 员应遵循单方向工作原则，各工作区相对隔离。

7  进行荧光 PCR 实验的工作桌面及相关物品应定期用 1%次氯酸钠、75%酒精、1mol/L 盐酸依次灭菌 和消毒，或定期用紫外灯灭菌和消毒。

8  测试样品时，应做好生物安全防护。

9  试验完毕后，使用过的试剂盒、样品和试剂应进行无害化处理。 【规格】 50 份/盒

【贮藏与有效期】 −20℃以下保存，有效期为 12 个月。

【生产企业】