小反刍兽疫竞争 ELISA 抗体检测试剂盒说明书 

【作用与用途】 用作检测小反刍兽疫血清抗体，适用于小反刍兽疫抗体检测、诊断及流行病学调查。

 

【溶液配制】 1倍PBST ：将本试剂盒配备的25倍PBST浓缩液用无离子水或蒸馏水做1:25稀释。 

 

【操作步骤及方法】

1. 加样

1.1 对照：取已包被小反刍兽疫抗原酶标板（根据样品多少，可拆开分次使用），每次均应设小反刍兽疫 阳性对照血清、小反刍兽疫阴性对照血清、单克隆抗体工作液对照及空白对照孔，其中阴性对照血清应设 2孔，阳性对照血清应设2孔，每孔加入相应血清（阴性对照血清、阳性对照血清）50 μl；空白对照应设2 孔，每孔加 100 μl 1倍PBST；单克隆抗体对照设4孔，每孔加 50 μl 1倍PBST。 

1.2 待检样品：在待检血清孔，每孔加入待检血清样品50 μl。

1.3 除空白对照外，其他各孔加单克隆抗体工作液 50 μl。

2. 加样完毕后，将酶标板置于平板振荡器轻柔振荡混匀，用封板膜封板，置37℃下温育60 min。

3. 取出酶标板甩干，用1倍PBST洗涤4-5次，在吸水纸上拍干。 

4. 每孔加入兔抗鼠酶标工作液 50 μl。 

5. 加样完毕后，将酶标板置于平板振荡器轻柔振荡混匀，用封板膜封板，置37℃下温育60 min。

6. 取出酶标板甩干，用1倍PBST洗涤4-5次，在吸水纸上拍干。

7. 每孔加入底物溶液 50 μl，置37℃避光静置反应15 min。 

8. 每孔加入 50 μl 终止液。 

9.用酶标仪读取OD450nm值。 

 

【结果判定】 计算同一酶标板上单抗对照孔，阴、阳性血清对照孔和每份待检血清孔在450nm波长的平均吸光值（OD450nm），根据以下公式计算阴、阳性血清及待检血清的抑制率（PI值）： 公式：PI=[ 1－（样本孔的OD450nm/单抗对照孔的OD450nm）]×100%。 

 

判定标准： 

1. 当阴性对照血清PI＜40%，阳性对照血清PI＞60%时检测结果成立，否则该次检测结果无效。 

2. 进行抗体效价评估时，待检血清PI ≥45%，抗体阳性；PI＜40%，抗体阴性；40%＜PI＜45%，则判定可 疑。 

3. 诊断或流行病学调查时，待检血清PI≥50%，阳性；PI＜50%，阴性。 

 

【注意事项】 (1) 本品仅供体外诊断用途。 

(2) 试剂盒应2～8℃运输、保存，使用前各试剂应平衡至室温，使用后放回2～8℃保存。 

(3) 不同批号的试剂盒组份不得混用，不同试剂使用时应防止交叉污染。 

(4) 冰冻血清样品应充分融化，且应混和均匀。 

(5) 未用完的反应板条应加干燥剂密封保存。 

(6) 对照血清与酶标抗体中含有微量防腐剂，应防止与皮肤接触。 

(7) 稀释25倍PBST浓缩液时，如发现有结晶，应加热使其溶解后再使用。 

(8) 底物对强光和氧化剂敏感，应避光保存，防止氧化剂污染。 

(9) 终止液含0.3 M硫酸，防止接触皮肤、眼睛与粘膜等。 

(10) 应严格按照各操作步骤规定的时间和温度进行操作。 

 

【规格】 2块板/盒 

 

【贮藏与有效期】 试剂盒2～8℃保存，有效期为6个月